Yn yr oes ôl-epidemig, mae'r term "profion asid niwclëig" yn gyfarwydd i bob un ohonom, ac mae wedi dod yn rhan o'n bywyd bob dydd.
Felly, a ydych chi'n gwybod sut mae profion asid niwclëig yn canfod firysau? A sut mae profion asid niwclëig yn gwneud firysau anweledig yn "weladwy"?
01 Beth yw asid niwclëig
Asid niwcleig yw'r term cyffredinol am DNA ac RNA.
Mae asid niwcleig yn elfen hanfodol o'r holl fywyd hysbys ar y ddaear. Y DNA rydyn ni'n ei ddweud yn aml yw asid deocsiriboniwclëig. Deunydd genetig y coronafirws newydd yw RNA - asid riboniwcleig.
Profi mwyhau asid niwcleig
02 Beth yn union mae profion asid niwclëig yn ei ganfod?
Y sylwedd ar gyfer canfod asid niwclëig yw asid niwclëig y firws.
Mae'r coronafirws newydd yn firws sydd ond yn cynnwys RNA, ac mae'r dilyniant RNA penodol yn y firws yn farciwr sy'n gwahaniaethu rhwng y firws a phathogenau eraill. Canfod asid niwclëig yw darganfod a oes asid niwclëig o firws goresgynnol tramor yn sbesimen anadlol neu waed y claf i benderfynu a yw wedi'i heintio gan y coronafirws newydd. Mae mwyafrif helaeth y darganfyddiad asid niwclëig cyfredol o'r coronafirws newydd yn defnyddio'r dull PCR meintiol fflwroleuol i ymhelaethu ar ddilyniant targed yr RNA firaol gan PCR ar ôl trawsgrifio gwrthdro.
Mae PCR, neu adwaith cadwynol polymeras, yn dechneg bioleg foleciwlaidd a ddefnyddir i chwyddo darnau DNA penodol; mae'n cyfeirio at adwaith DNA polymeras-catalyzed genynnau penodol neu Mae adwaith ymhelaethu in vitro cyflym ar ddilyniannau DNA hefyd yn cael ei alw'n ymhelaethiad genyn in vitro. Technoleg PCR meintiol fflwroleuol yw ychwanegu system adroddwr fflwroleuol i'r system adwaith PCR, a defnyddio'r newid signal fflwroleuol i fonitro'r broses PCR mewn amser real, er mwyn gwireddu canfod meintiol y templed cychwynnol.
Er mwyn canfod asid niwclëig, y cam cyntaf yw casglu sampl. Ar hyn o bryd, y dull samplu mwyaf confensiynol yw: defnyddio swabiau gwddf neu swabiau trwynol i sychu a chasglu'r llwybr anadlol uchaf (pharyncs neu geudod trwynol); bydd y samplau a gasglwyd yn cael eu selio'n llym, ac yna'n cael eu hanfon i'r labordy i'w profi'n raddol.
1. Echdynnu RNA firaol
Mae RNA y firws yn cael ei dynnu o'r sampl yn gyntaf. Ychwanegu adweithyddion echdynnu asid niwclëig i'r sampl i ddinistrio'r firws a rhyddhau'r asid niwclëig.
2. "Trawsgrifio gwrthdro" o RNA firaol i cDNA
Trwy dechnoleg trawsgrifio gwrthdro (RT), mae RNA y firws yn cael ei "wrthdroi" i mewn i DNA penodol sy'n fwy cyfleus i'w ganfod, hynny yw, cDNA.
3. Ymhelaethu a chanfod cDNA
Mewn gwirionedd, p'un a yw'n swab gwddf, swab trwynol neu hyd yn oed samplu gwaed, mae'r cynnwys firws yn y sampl yn gymharol isel, hyd yn oed mewn cleifion sydd wedi'u heintio'n ddifrifol (mae'r llwyth firaol yn fawr); oherwydd bod y gronynnau firws yn rhy fach ac mae'r cyfaint samplu yn gyfyngedig, Mae nifer y firysau a gynhwysir yn y sampl yn dal yn rhy fach ar gyfer canfod asid niwclëig.
Felly, trwy ddefnyddio technoleg PCR, mae'r arolygwyr yn ymhelaethu ar "gyfrinair" unigryw'r coronafirws newydd yn y sampl i'r pwynt lle gall yr offer ei ganfod, er mwyn barnu a yw'n haint positif. Mae'r holl broses o fachu deunydd genetig y firws fel pysgota. Bydd y bachyn yn ei adnabod ac yn cydio ynddo, fel nad oes gan y firws unrhyw le i guddio.
Yn syml, y nod yw ymhelaethu ar nifer y cDNA, fel bod y cDNA yn cael ei ailadrodd yn barhaus, fel bod y nifer yn cynyddu'n esbonyddol.
Rhennir y broses PCR safonol yn dri cham:
Dadnatureiddio: Y defnydd o dymheredd uchel i wahanu'r llinynnau dwbl o DNA. Mae'r bondiau hydrogen rhwng llinynnau dwbl DNA yn cael eu torri ar dymheredd uchel (93 - 98 gradd ).
Anelio: Ar ôl i'r llinynnau dwbl DNA wahanu, mae'r tymheredd yn cael ei ostwng i ganiatáu i'r paent preimio glymu i'r DNA un llinyn.
Estyniad: Mae DNA polymeras yn syntheseiddio llinyn cyflenwol ar hyd y llinyn DNA o'r preimiwr sydd wedi'i rwymo pan fydd y tymheredd yn cael ei ostwng. Pan fydd yr estyniad wedi'i gwblhau, mae un gylchred yn cael ei chwblhau ac mae nifer y darnau DNA yn dyblu. Ailadroddwch y tri cham hyn 25-35 o weithiau, a bydd nifer y darnau DNA yn cynyddu'n esbonyddol.
Templed llinyn dwbl PCR
Tra bod y cDNA yn cael ei chwyddo, mae'r stilwyr fflwroleuol yn y pecyn yn gweithio ar yr un pryd. Bydd yn rhyddhau signal fflwroleuol, a phob tro y caiff y cDNA ei chwyddo, bydd y signal fflwroleuol yn cynyddu ychydig, a gall y synhwyrydd PCR gofnodi gwerth Ct o gynnydd signal fflwroleuol.
Mae'r gwerth Ct yn ddangosydd pwysig ar gyfer barnu a yw'r firws asid niwclëig yn negyddol neu'n bositif. Y lleiaf o DNA cychwynnol, y mwyaf o gylchoedd PCR sydd eu hangen i gyrraedd trothwy penodol, a'r uchaf yw'r gwerth Ct. I'r gwrthwyneb, po fwyaf DNA cychwynnol, yr isaf yw'r gwerth Ct. Mae swm cychwynnol DNA yn adlewyrchu faint o RNA firaol yn y sampl, sydd yn ei dro yn adlewyrchu faint o firws yn y sampl. Felly, os na chanfyddir y gwerth Ct neu os yw'n uwch na gwerth penodol, yna bernir bod y claf a amheuir yn negyddol; os yw'n is na'r gwerth hwn, yna bernir bod y claf a amheuir yn bositif.
Yn ystod yr adwaith PCR, mae dewis nwyddau traul PCR hefyd yn un o'r ffactorau pwysicaf sy'n effeithio ar ganlyniadau canfod asid niwclëig.