Fel y gwyddom i gyd, gellir rhannu'r mathau o gelloedd sy'n cael eu meithrin yn y labordy yn fras yn ddau fath: celloedd glynu a chelloedd atal, a dim ond ychydig o fathau o gelloedd sy'n bodoli yn y ddau gyflwr.
Mae celloedd crog yn cyfeirio at fath o gelloedd a all dyfu mewn cyflwr crog mewn cyfrwng heb ddibynnu ar gynheiliaid, fel lymffocytau a'r rhan fwyaf o gelloedd sy'n deillio o systemau gwaed. (fel celloedd lewcemia llygoden WEHI-3, celloedd lewcemia dynol K-562, HL-60). Yn y diwydiant, mae mwy a mwy o gelloedd ymlynol wedi'u dofi a'u meithrin mewn ataliad llawn. Ar hyn o bryd, defnyddir celloedd SP2/0, NS0, CHO, BHK a HEK293 yn bennaf yn y diwydiant, ac fe'u defnyddir yn bennaf ar gyfer cynhyrchu protein ailgyfunol; mae'r celloedd llwybr a ddefnyddir yn gyffredin mewn cynhyrchion biolegol milfeddygol yn bennaf yn cynnwys celloedd BHK21 wedi'u meithrin mewn ataliad llawn, celloedd MDCK; a chelloedd Vero, celloedd PK, celloedd ST, celloedd Marc145, ac ati gyda chymorth diwylliant ataliad microcarrier, mae gan bob cell nodweddion gwahanol.
Celloedd crog
Celloedd crog "thp{0}}" 200x
Yn gyffredinol, mae celloedd crog yn haws eu trin na chelloedd ymlynol oherwydd nid oes angen trypsineiddiad i symud celloedd crog. Ond nid yw hyn yn golygu bod celloedd crog yn haws i'w tyfu na chelloedd ymlynol. I ddechreuwyr, mae'n fwy heriol. Mae yna broblemau amrywiol bob amser: er enghraifft, pam mae celloedd marw a gwahaniaethu celloedd bob amser yn ymddangos; cytunir bod y darn yn hawdd, ond y canlyniad fydd gwahaniaethu; problemau'n ymddangos eto ar ôl cryopreservation ac adferiad!
Nesaf, gadewch i ni drafod rhai pwyntiau allweddol am feithrin celloedd crog ~
Pwynt 1: Digon o amynedd, mae'n angenrheidiol iawn
Mae gan lawer o gelloedd crog hyfywedd cymharol wael pan fyddant newydd gael eu hadfer ar ôl cryop cadw. Ar yr adeg hon, mae angen inni fod yn ddigon amyneddgar i aros i'r celloedd gwblhau eu hunan-atgyweirio a mynd i mewn i'r cyfnod twf logarithmig. Er enghraifft, mae THP-1 (lewcemia monocytig dynol) yn aml angen 7-10 diwrnod o gyfnod adfer o ddadmer i amlhau normal; Mae Jurkat, Clone E6-1 (celloedd lewcemia lymffosytig T dynol) hefyd angen 5-7 diwrnod ar ôl gwella. Dychwelyd i'r wladwriaeth cyn rhewi. Gall dechreuwyr roi'r gorau i hyfforddiant yn ystod y cyfnod hwn, felly byddwch yn fwy amyneddgar! Mae tyfu celloedd o'r fath hefyd yn broses o feithrin amynedd!
Pwynt 2: Deall dwysedd y brechiad
Yn gyffredinol, ni ddylai dwysedd celloedd crog fod yn is na 500,000/ML. Mae llawer o gelloedd crog yn ddibynnol ar ddwysedd, ac mae diffyg amlhau a achosir gan ddwysedd isel hefyd yn un o'r problemau cyffredin i ddechreuwyr. Wrth gwrs, ychydig iawn o gelloedd y mae eu cyflwr yn gwaethygu pan fo'r dwysedd yn uchel, megis W6/32 (celloedd hybridoma celloedd B llygoden). Felly, mae'n bwysig iawn chwilio am wybodaeth berthnasol i ddeall nodweddion celloedd cyn meithrin celloedd anhysbys. Dim ond trwy adnabod eich hun a'r gelyn y gallwch chi ennill pob brwydr!
Ni ddylai amlder ailosod canolig gael ei gyfyngu i "yn amlwg". Peth byw yw celloedd. Yn ystod cylch diwylliant parhaus, gellir ychwanegu maetholion penodol megis cyfrwng atodol a glwcos sawl gwaith yn dibynnu ar statws twf y celloedd i gynnal statws twf da o'r celloedd. . Yn ystod y broses diwylliant atal dros dro, gyda gormodedd o gelloedd, y defnydd o faetholion yn y cyfrwng gwreiddiol a'r cynnydd mewn metabolion, bydd hyfywedd celloedd yn lleihau, a bydd ychwanegu maetholion yn amserol yn gwneud y celloedd mewn amgylchedd byw cymharol dda. Nid af i fanylion yma, ac osgoi allgyrchu aml ac ailosod hylif.
Gadewch i ni siarad am y dull amnewid hylif:
①Dull cyfnewid hylif llawn allgyrchol
Hynny yw, tynnwch yr holl hen gyfrwng trwy allgyrchiad (800-1000rpm, 5min), a rhoi cyfrwng ffres yn ei le. Mae'r dull hwn yn addas ar gyfer amnewid canolig celloedd crog "croen solet" wedi'u codi'n dda (fel K562), neu'r sefyllfa bresennol lle mae'r celloedd mewn cyflwr da ac mae'r dwysedd yn uchel, gan arwain at ddefnydd mawr o gyfrwng. Mantais y dull hwn yw bod y cyfrwng yn cael ei newid yn drylwyr a gellir tynnu rhai malurion celloedd, ond bydd hefyd yn achosi rhywfaint o ddifrod mecanyddol i'r celloedd.
② Dull cyfnewid hanner allgyrchol
Hynny yw, trwy allgyrchu (800-1000rpm, 5min) ataliad celloedd 50 y cant, disodli 50 y cant cyfaint o gyfrwng ffres. Mae'r dull hwn yn addas ar gyfer cymharu celloedd anodd eu diwylliant "rhagrithiol" (fel thp-1), neu'r sefyllfa lle mae'r dwysedd yn isel ond mae angen tynnu mwy o falurion yn y cyflwr addasu.
③ Dull cyfnewid hylif gwaddodi
Hynny yw, yn lle defnyddio centrifuge, defnyddir y dull o waddodi naturiol trwy ddisgyrchiant i wahanu'r cyfrwng oddi wrth y celloedd, er mwyn disodli'r cyfan neu ran o'r cyfrwng ffres. Fodd bynnag, mae ganddo gyfyngiadau cymhwyso - dim ond ar gyfer celloedd a all ffurfio clystyrau celloedd o faint penodol y mae'n addas (fel arall ni allant setlo'n naturiol a dim ond ar gyflymder isel y gellir eu centrifugio), yn enwedig wrth ddelio â chelloedd sy'n dibynnu ar agregu celloedd i amlhau. , megis NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Gall y dull hwn leihau'r difrod mecanyddol a achosir gan y broses allgyrchu yn ystod y broses cyfnewid hylif, tra'n cadw'r màs celloedd cyfanredol, ac mae cael gwared â malurion celloedd yn gymharol drylwyr.
Ar ôl meistroli'r pwyntiau uchod, ynghyd â hedyn cell da, dim ond rownd y gornel i dyfu celloedd crog "hardd"!
plât diwylliant cell
Defnyddir plât meithrin celloedd siâp U Yongyue Medical yn bennaf ar gyfer meithrin celloedd crog, gan ddefnyddio polystyren gradd feddygol (PS), a gynhyrchwyd mewn gweithdy puro lefel 100,000-, wedi'i sterileiddio gan arbelydru, yn rhydd o DNase, RNase, a pyrogen -rhydd, Diogelwch a diogelu'r amgylchedd.
Mae platiau diwylliant celloedd ar gael mewn gwahanol fanylebau i ddiwallu anghenion gwahanol ddiwylliannau bacteriol. Rhennir y mathau o gynnyrch yn 6-wel, 12-wel, 24-wel, 48-wel, 96-wel, a 384-wel, o sydd 96-yn dda wedi'i rannu'n waelod gwastad, gwaelod U, gwaelod V; Defnyddir platiau diwylliant siâp U yn bennaf ar gyfer meithrin celloedd crog; Defnyddir platiau diwylliant siâp V yn bennaf ar gyfer arbrofion hemagglutination imiwnolegol.
