1. Adferiad
●1. Tynnwch y cryovial allan o'r nitrogen hylifol, rhowch ef ar unwaith mewn baddon dŵr 37 gradd, a'i ysgwyd ychydig. Ar ôl i'r hylif doddi (tua 1-1.5 munud), tynnwch ef allan a chwistrellwch ychydig o alcohol a'i roi ar y fainc waith hynod lân.
●2. Allsugno'r ataliad cell uchod i mewn i diwb centrifuge 15ml wedi'i lenwi â chyfrwng 10ml (golchwch y tiwb cryopreservation gyda chyfrwng i olchi'r holl gelloedd sy'n glynu wrth y wal), a centrifuge ar 1000 rpm am 5 munud.
●3. Arllwyswch y supernatant ac ychwanegu 1ml o gyfrwng i atal y celloedd. Wedi'i allsugno i ddysgl petri 10cm sy'n cynnwys 10ml o gyfrwng meithrin a'i ysgwyd yn ysgafn yn ôl ac ymlaen i wneud y celloedd yn y ddysgl petri wedi'u dosbarthu'n gyfartal.
●4. Labelwch y math o gell a'r dyddiad, enw'r triniwr, ac ati, a'i roi mewn deorydd CO2 i'w drin. Ar ôl i'r celloedd gadw at y wal, newidiwch y cyfrwng.
●5. Newidiwch y cyfrwng bob 3 diwrnod.
2. Pasio
●1. Darn pan fydd cwmpas y gell yn y ddysgl feithrin yn cyrraedd 80 y cant -90 y cant .
●2. Aspirate y cyfrwng gwreiddiol.
●3. Ychwanegu trypsin priodol (dim ond digon i orchuddio'r celloedd) a'i dreulio am 1-2 munud.
●4. Ar ôl i'r celloedd gael eu talgrynnu, ychwanegwch gyfaint cyfartal o gyfrwng sy'n cynnwys serwm i derfynu'r treuliad.
●5. Defnyddiwch bibed i atal y celloedd trwy bibed.
●6. Allsugno'r celloedd i mewn i diwb centrifuge 15ml a centrifuge ar 1000 rpm am 5 munud.
●7. Arllwyswch y supernatant, ychwanegu 1-2ml cyfrwng, a chwythu i fyny y celloedd.
●8. Trosglwyddwch y celloedd i sawl dysgl yn dibynnu ar y math o gell. Yn gyffredinol, mae 5 cell canser a 3 chell normal. Parhewch i feithrin.
3. Cryopreservation Treuliwch y celloedd a'r allgyrchydd (ibid.). Ataliwch y celloedd gyda'r toddiant rhewi parod, a'u dosbarthu'n cryovialau wedi'u sterileiddio, gadewch iddynt sefyll am ychydig funudau, a nodwch y math o gell a'r dyddiad cadw cryop. 4 gradd am 30 munud, -20 gradd am 30 munud, -80 gradd dros nos, ac yna ei roi mewn nitrogen hylifol i'w storio. Paratoi datrysiad cryopreservation: 70 y cant cyfrwng cyflawn ynghyd â 20 y cant FBS ynghyd â 10 y cant DMSO. Dylid ychwanegu DMSO yn araf, gan ysgwyd wrth ddiferu.